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Yeast Lysates for Westerns

时间: 1632245407 来源: 蚂蚁淘 阅读 (452)

  • Cells are grown for 2-3 days as 1.5ml prep. under selection for the plasmid of interest. Spin cells down 2.6K for 5min.
  • Resuspend in 1ml 0.25m NaOH/1% 2-mercaptoethanol
  • Incubate 10min on ice.
  • Add 0.16ml 50% trichloroacetic acid
  • Incubate for 10min on ice.
  • Pellet 14K 10min.
  • Resuspend pellet in 1ml ice cold acetone.
  • Pellet 14K 10min.
  • Air dry pellet and resuspend in 200-500ul SDS SB and proceed as described below in section on western transfer
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